1. 购买和使用谱析生物生化试剂盒注意事项：

　　1) 购买试剂盒前请弄清以下问题：

　　① 根据取样记录，确认样品情况。主要包括样品的种类、数量和样品保存状况。

　　② 根据实验设计或文献报道，确认测定哪些指标。测定指标最好是成系列的，这样便于得出明确结论，也好发表文章。

　　③ 提前了解所在实验室的仪器设备情况，避免因为仪器设备不能满足，造成试剂盒购买后无法使用。

　　2) 购买咨询：

　　① 客户提供检测样本对象、研究目的和测定指标，我们提供相关试剂盒的情况和所需仪器设备以及自备用品清单，确认哪些指标客户能够通过购买我们的试剂盒进行测定。

　　② 客户提供样本情况，包括样本种类、样本数量以及样本保存状况，我们计算所需试剂盒的数量和报价，以免错购、漏购、少购或者多购。

　　3) 收到试剂盒后请注意以下事项：

　　① 收到试剂盒后，检查外包装有无破损，打开试剂盒找到说明书，按照说明书中对于试剂种类和状态的描述，清点试剂种类和数量是否正常。

　　② 按照说明书的要求，把试剂放到对应温度的冰箱或者冷藏室保存。

　　③ 收到试剂盒后，请尽快使用。为了保证测定质量，试剂盒开封后一般应该在一个月内用完。

　　4) 预实验

　　① 选择2-3个预期差异比较大的样品。

　　② 按照说明书配制试剂，包括粉剂和自备试剂。

　　注意：现配现用的试剂，一定要在检测前再配制，避免试剂配制之后放置时间太久！

　　③ 严格按照说明书进行称量、匀浆、离心、取样、测定。其中，鉴定样品要进行至少两次平行测定，作为技术重复，反映客户实验操作和仪器设备的重复性好坏。

　　④ 分析预测定结果。待预实验结果确认无误后，再开始正式测定。

　　5) 正式测定

　　① 预实验结果无误后，开始正式测定！

　　② 实验时请严格按照说明书上的操作要求进行实验！

　　③ 实验结束后，分析检测数据。

　　2. 说明书上写的均为新鲜样本，如果样本冻存对结果影响大吗？

　　1) 通常新鲜样本和冷冻样本都可用于大多数生化指标的测定，但是最好还是采用新鲜样本，因为根据指标的不同，样本的冻存对结果的影响也不同。一般情况下，随着冻存时间的延长，样本的酶活力会逐渐下降，甚至会完全失活。而某些指标中，冻存样本的检测结果会比新鲜样本检测结果高，如血氨。

　　2) 组织匀浆样本最好当天检测，若不能当天检测，须置于-80℃并尽快检测。（这种情况推荐客户直接冻存组织，而不是组织匀浆）。注意：样本切忌反复冻融。

　　3. 生化试剂盒样本检测的一般要求：

　　1) 于生化检测而言，样本最好无溶血、脂血、黄疸的现象。组织样本需将血液洗净擦干后再进行称重处理。

　　2) 样本处理后最好尽快进行检测，且保存于冰盒之上，待测。

　　3) 样本需澄清，若不澄清，需离心后取上清进行检测（特殊指标除外）。

　　4) 样本值应在试剂盒线性范围内，若超过线性范围，需稀释后再进行检测，若低于检测范围，需增加样本浓度后进行检测。

　　4. 血清（血浆）样本的制备

　　血清和血浆均是不含细胞（包括血小板）等有形成分的血液液体部分，其主要区别是血清不含凝血因子和血小板，血浆则含有凝血因子，它们的制备方法如下：

　　1) 血清的制备：获得的血液不能抗凝，盛于离心管或可以离心的器皿中，静置或置于37℃环境中促其凝固，待血液凝固后，将其平衡并离心（一般为1000-2000g，离心 5～10 min），得到的上清液即为血清，可小心将上清吸出（注意切勿吸出细胞成分），分装备用。

　　2) 血浆的制备：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝剂（抗凝剂：血液 = 1：9，将血液加到一定量后颠倒混匀，离心（离心条件同上）后所得的上清液即为血浆。初用者最好将上清移至另一清洁容器，吸出血浆时用毛细吸管贴着液面逐渐往下吸，切忌不能吸起细胞成分。

　　5. 组织或细胞匀浆样本的制备

　　收集组织或细胞样本，加入匀浆介质后进行匀浆，有4种匀浆方式可以选择。

　　1) 手工匀浆：将样本（含匀浆介质）倒入玻璃匀浆管中，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的容器中，右手将捣杆垂直插入匀浆管中，上下转动研磨数十次（6-8 min），使组织匀浆化。

　　2) 机械匀浆：将已称重的组织装入EP管，加入匀浆介质，用组织匀浆机，在冰水浴条件下，60 Hz，90s研磨制成组织匀浆，皮肤、肌肉组织及植物组织等可适当延长匀浆时间。

　　3) 超声破碎：用超声波发生器以振幅14 μm超声处理30s，在冰水浴条件下，破碎细胞；或者用超声波破碎仪，200 W，2s/次，间隙3s进行处理，总时间5min。

　　4) 反复冻融：适用于细胞样本，即用低渗液或双蒸水重悬细胞，再将细胞悬液进行“冷冻-融化-冷冻”循环，重复3次左右。值得注意的是，此方法会使某些酶的活力受影响。因此，检测细胞样本的酶活力时不推荐使用此方法。

　　6. 细胞的收集方式

　　悬浮细胞可以直接离心来收集细胞沉淀，根据细胞种类选择合适的转速，一般不超过1500g，常用转速是800-1000g。

　　贴壁细胞的收集方式主要有2种：

　　1) 胰蛋白酶处理，若样本检测的是酶活力则不推荐此方法，因为胰蛋白酶会影响样本中酶活力的检测。另外，商品化的胰蛋白酶通常含有EDTA，若说明书中说明样本中不能含有EDTA，那也不能用此方法收集细胞。

　　2) 细胞刮收集细胞，推荐使用此方法收集细胞。

　　7. 常用抗凝剂的种类

　　1) EDTA：其机制是通过与水相中的钙离子形成稳定的螯合物而阻止血液凝固，EDTA能影响某些酶的活性，因此检测血液样本中指标的酶活时，不推荐使用此抗凝剂。

　　2) 肝素：是血液化学成分测定中最好的抗凝剂，其抗凝机制是与抗凝酶Ⅱ一起，在低浓度能抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之间的作用，并能加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成；还有抑制凝血酶的自我催化及抑制因子X的作用。通常用肝素抗凝的剂量是10.0～12.5 IU/mL血液。

　　3) 枸橼酸盐：其抗凝机制是枸橼酸盐与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固。

　　4) 草酸钾：通过草酸根与血液中的钙离子形成草酸钙沉淀，使其无凝血功能。钾、钙含量测定的血样不能用草酸钾抗凝。

　　8. 组织和细胞样本为什么要测蛋白?

　　测组织和细胞样本时要先匀浆，匀浆的程度不一样释放出的蛋白也不一样，我们测蛋白就是为了校正匀浆破碎的程度。而血清血浆样本可以直接测定，无需用蛋白浓度校正。

　　9. 组织匀浆时有的匀浆介质是PBS，有的却是特殊的匀浆介质，用不同的匀浆介质有什么区别吗？

　　匀浆介质的作用是：在匀浆的过程中，提高指标的提取效率，降低指标的处理损失，保护指标的稳定性。建议尽量用说明书中的匀浆介质处理样本，不要随意更改匀浆介质。

　　10. 分光光度计检测法与酶标仪检测法试剂盒能否通用？

　　同一指标的分光光度计检测法与酶标仪检测法试剂盒不可以通用，因为两者测定体系不同，检测仪器的灵敏度也不一样。每个试剂盒都有规定适用的仪器，建议按照说明书的操作步骤进行操作，不要随意改变检测仪器。如果客户自行改变，不能保证测定质量，公司不承担实验后果，包括售后处理。

　　11. 分光光度计，酶标仪及生化分析仪的优缺点。

　　1) 分光光度计价格低廉，波长范围广（通常为全波段），但是样本使用量大，操作不便；

　　2) 酶标仪仪器简单、操作方便，但是灵敏度低、可供选择的波长少、难以实现自动化；

　　3) 生化分析仪样本使用量小，操作简单，自动化程度高，结果准确，但是仪器价格高昂。

　　12. 可以改变试剂的加液顺序吗？

　　绝对不可以，若改变可能会造成反应不能正常进行，导致实验失败。

　　13. 为什么同一样本平行测定结果差异大（复孔差异大）？

　　1) 样本原因：样本体系不均匀、样本提取时离心不完全、杂质等原因。

　　2) 仪器原因：仪器不稳定造成系统误差大，一般仪器需要预热30分钟后再进行比色检测。

　　3) 操作原因：由于操作不熟练，加样和加液手法问题，造成平行结果差异大。

　　14. 测定管与对照管或者空白管为什么会没有差异，甚至低于对照管或空白管？

　　1) 如果空白值偏高，可能是空白管存在一定的污染。

　　2) 样本原因导致测定与对照或空白结果几乎没有差异：

　　① 样本本身的指标含量偏低导致的，可以考虑适当增加样本量或者提高样本浓度；

　　② 样本提取是否正确和充分，提取步骤是否按照说明书操作步骤进行。如果样本提取不充分或者未按说明书要求操作，也可能会导致结果偏低的情况。

　　③ 样品保存不当导致的。需要客户自己仔细检查样本处理、保存以及制备状况。

　　3) 反应体系中存在颗粒或者气泡。随着时间延长，颗粒沉淀或者气泡破裂，会导致吸光度显著下降，出现负值。颗粒通常来源于样本提取液，可以进行再次离心，确保得到澄清的上清液；当然也可能来自试剂，测定前观察试剂中是否有沉淀，如果有，待充分溶解后再小心吸取上清液。气泡通常来源于实验操作或反应本身，可以通过提高实验操作的精确性，降低反应速度来防止气泡的产生。

　　4) 试剂盒质量问题。可以换一种确定含有该指标的完全不同的样本来验证。如果同样没有活性，那表明试剂盒质量问题的可能性很大。请客户立即联系公司技术人员。

　　15. 标准品或者样本为什么不显色？

　　1) 样本中确实不含有该指标或者指标含量太低导致的。

　　2) 前处理不当：例如测定酶活，使用了导致酶失活的化学试剂等。

　　3) 样本保存不当或提取方法不当等。

　　4) 试剂保存不当，包括保存温度、放置太久过期了等，导致试剂盒中某些试剂失效。

　　16. 数据变化趋势不符合预期？

　　通常客户在实验前，会根据参考文献或此前实验室的相关测定结果，对实验结果有一个预估变化趋势。但是，实际测定的数据变化有时却并不符合预期。

　　① 先查找实验技术问题，以及计算公式和单位有没有问题；

　　② 再找样本质量有没有问题；

　　③ 若两者都没有问题，我们就要思考实验方案，有时不符合预期的结果反而意味着研究的新意，甚至是新发现。

　　④ 如果选择了测定系列指标，就可以通过相关指标的变化趋势是否一致，来判断该指标的变化是否正常，因为同时几个相关指标变化都不正常的可能性比较小。

　　17. 为什么检测数据与文献报道或者实验室此前测定数据结果差异大？

　　1) 样品本身的影响：同一指标在不同样品，同一样品不同发育阶段或者不同环境下，其浓度或酶活会发生非常大的变化。

　　2) 测定方法的影响：同一指标因为测定方法不同，检测结果会出现较大的差异，与文献对比时，应注意文献的检测方法、培养和处理条件及计算公式、单位、单位的定义等。

　　3) 操作和仪器设备的影响：操作者取样习惯、匀浆程度和外部检测环境等都会对检测结果有很大影响。不同仪器设备的检测限和稳定性也会有一定影响。

　　4) 与其他文献检测结果比较时，应比较实验组与对照组的数据差异性和变化趋势，而不是检测结果的数值。